跟学动物实验：过敏性鼻炎动物模型

新年过后，即将立春，春暖花开的日子越来越近，花粉和柳絮即将满天飞，过敏性鼻炎的小伙伴们要注意防护。

何为过敏性鼻炎？
过敏性鼻炎（Allergic Rhinitis，AR）又称变应性鼻炎，是机体暴露于变应原后主要由免疫球蛋白E（IgE）介导的鼻黏膜非感染性慢性炎性疾病。其发病病因繁多，诸如花粉刺激、环境中的灰尘、动物皮屑、冷热空气等，并且存在季节性和长年病变，主要病变部位是鼻粘膜。以突然的、反复发作的鼻痒、鼻塞、连续性喷嚏、水样清涕和嗅觉障碍等为其主要临床症状。
目前，西医临床主要选择抗组胺药物( 如氯雷他定) 、糖皮质激素类、白三烯受体阻断剂等来治疗本病。这些药物虽然能短暂缓解鼻炎症状，但停药后容易复发，长期使用会出现不良反应，甚至会对激素产生依赖。
AR动物模型是开展AR研究的实验载体，复制稳定可靠、成功率高、操作简便、成本较低，且能较好模拟接近人体疾病规律和病理状态的过敏性鼻炎动物模型是开展实验研究的基础，也是实验研究的难点。
动物的选择
试验动物多选取兔、大鼠、小鼠或豚鼠。
造模方法
一、卵清蛋白( ovalbumin，OVA)
全身及局部攻击法
利用OVA抗原混悬液注射引发免疫应答反应，再将抗原溶液局部滴鼻激发产生AR 症状；或不经体内注射，直接将抗原溶液滴鼻进行攻击，引起局部激发的方法制备模型。
01
腹腔注射法
腹腔注射法是最常用的造模方法。使用OVA混悬液经腹腔注射进行初次免疫，后用OVA溶液滴鼻作强化致敏。
造模方法：选取小鼠，在第 1、5、14、21 天以含 OVA 25μg、氢氧化铝凝胶［Al( OH)3］1 mg 加等渗盐水0.5 ml 给予小鼠腹腔注射进行基础致敏，基础致敏后于第 28 天开始以500μg OVA 加 20 μl 等渗盐水给予小鼠双侧鼻腔滴注，连续进10d。
02
四肢及背部注射法
此方法与腹腔注射法的区别是：皮下注射，且在混悬液中加入一定数量灭活百日咳杆菌的方法以加强基础致敏的效果。
造模方法1：造模第1天将1ml 等渗盐水+1.5mgOVA+3 mg Al(OH)3 + 1 × 1010个灭活百日咳杆菌注射到大鼠前后足跖皮下，前后足跖注射0.2ml/只和0.3 ml/只，第5天将1ml等渗盐水 + 1mg OVA +2 mg Al(OH)3 注射到大鼠背部皮下，分5点，每点0.2 ml，第14天起 1% OVA 溶液滴鼻，1次/d，每侧鼻孔30μl，持续10d。
造模方法2：大鼠左右前肢和后肢跖部分别注射0.1 ml和 0.2 ml的抗原佐剂混悬液(含OVA1 mg /ml、百日咳杆菌1 × 1010个及Al(OH)3 2 mg) 进行致敏。初次致敏5d 后强化致敏，将 0.5 mg OVA 溶解于1 ml 等渗盐水注入大鼠背部，初次致敏第7天开始用 OVA 1 mg /ml 滴鼻，10μl /次，1次/d。
03
局部滴鼻法
造模方法：模型组和治疗组致敏剂量以每侧鼻孔 20μgOVA + 0.5mgAl(OH)3+0.1ml等渗盐水，2 次/d，连续10d予豚鼠双鼻孔喷滴。每次喷滴前，用 4% 利多卡因先喷鼻腔，以抑制鼻腔纤毛运动，延长过敏原在鼻腔停留时间。持续 5 d 后，以1% OVA 等渗盐水溶液，每侧鼻腔 0.1～0.15 ml激发，3 d /次，连续激发 11次。
优点1：腹腔内注射和皮内注射致敏与AR的自然过程差别较大，而雾化吸入容易造成下呼吸道的致敏，激发后易引发哮喘。豚鼠经鼻局部致敏和激发的方法，使模型较好的局限于变应性鼻炎的表现，避免了上述情况的发生。
优点2：豚鼠在解剖和生理上的特点，使其只能经鼻呼吸，而不能经口呼吸。一旦鼻腔发生阻塞，只能通过延长呼吸时间，尤其是吸气相来代偿，利用此特点，在本模型中采用呼吸频率来反映鼻腔气道阻力，从而观察到迟发相反应中双向鼻塞这一参数。
二、豚草花粉变应原全身及局部攻击法
造模方法：选取豚鼠，实验方法分为免疫接种和激发2个步骤。
①免疫接种：每只豚鼠用豚草花粉变应原液 0.75 ml 与等量佛氏完全佐剂或不完全佐剂进行人工免疫接种。第1次采用变应原加弗氏完全佐剂，于腹腔注射 0.5 ml，四肢皮下( 腋下、腹股沟)各注射 0.25 ml 共1.5 ml，2周后改为豚草花粉变应原加弗氏不完全佐剂，1次/周，连续2周。
②激发：免疫后第 4 周行鼻腔过敏原激发，配制0.5%豚草花粉变应原等渗盐水溶液，用加样器滴入豚鼠双侧鼻孔(每侧10μl) ，1次/d，连续5d 后改为隔天激发1次( 维持) 。
三、2，4-二硝基氯苯丙酮溶液滴鼻法
采用鼻腔内滴入2，4-二硝基氯苯丙酮液的局部攻击方法制作AR大鼠模型。
造模方法：于第7天和第14天鼻腔内滴1% 2，4-二硝基氯苯丙酮液 0.1 ml，再于第28天将0.1% 2，4-二硝基氯苯丙酮液0.1ml滴入大鼠鼻腔进行攻击，造成大鼠 AR 模型，次日观察，模型大鼠出现鼻红、搔抓鼻周、频繁喷嚏、大量清涕等典型 AR 的行为变化，而对照组无上述行为出现，显示造模成功。
四、2，4-二异氰酸甲苯酯( 2，4-toluene diisocyanate，TDI) 橄榄油溶液滴鼻法
造模方法：选用400g左右的健康豚鼠，将10%的TDI橄榄油溶液10μl，用加样器滴入豚鼠双侧前鼻孔( 每侧5μl) ，1 次 /d，连续5～7 d后，改为隔天给药(维持给药期)。
试验评价指标
一、细胞因子
包括IL-4、IL-5、IL-6 和 IL-13、IL-17、TNF-α的检测。
二、炎性细胞
包括检测鼻中隔黏膜炎性细胞总数、炎性细胞面积总和、炎性细胞平均光密度总和、炎性细胞积分光密度总和以及炎性细胞平均黑度总和。
总结
各种属的实验动物对药物的敏感性存在差异，不同的药物致敏机制也不相同，在实验时应根据实验需求合理选择。